Методичні вказівки по санітарно-мікробіологічному аналізу води поверхневих водойм

Утверждаю
Начальник Главного
санитарно-эпидемиологического
управления Министерства
здравоохранения СССР
В.Е.КОВШИЛО
19 января 1981 г. N 2285-81

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОМУ АНАЛИЗУ
ВОДЫ ПОВЕРХНОСТНЫХ ВОДОЕМОВ

 

Разработаны: Министерством здравоохранения СССР, Институтом общей и коммунальной гигиены им. А.Н. Сысина АМН СССР

при участии: Московского научно-исследовательского института им. Ф.Ф. Эрисмана, Киевского института общей и коммунальной гигиены им. А.Н. Марзеева, Куйбышевского института гигиены, городской санэпидстанции г. Москвы.

Рассмотрены и рекомендованы к утверждению Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Министерства здравоохранения СССР.

 

Настоящие Методические указания распространяются на воду водоемов, используемых или намечаемых к использованию в качестве источников централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения или для рекреационных целей, и устанавливают методы санитарно-микробиологического анализа воды.

Методические указания являются обязательными при исследовании качества воды поверхностных водных объектов в соответствии с ГОСТ 17.1.3.03-77 "Охрана природы. Гидросфера. Правила выбора и оценка качества воды источников централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения" и ГОСТ 17.1.5.02-80 "Охрана природы. Гидросфера. Гигиенические требования к зонам рекреации водных объектов".

Санитарно-микробиологический анализ воды подземных источников производят в соответствии с ГОСТ 18963-73 "Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа".

При выборе нового поверхностного источника централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения или места рекреации санитарно-микробиологический анализ осуществляется учреждениями санэпидслужбы, а также другими организациями, которым санэпидслужба предоставляет право проведения санитарно-микробиологических анализов, по показателям, установленным ГОСТ 17.1.3.03-77: основной показатель - лактозоположительные кишечные палочки, дополнительные показатели - сапрофитные микроорганизмы, E. coli, энтерококки, фаги кишечных палочек, сальмонеллы, шигеллы, кишечные вирусы.

При лабораторно-производственном контроле качества воды эксплуатируемых источников водоснабжения санитарно-микробиологический анализ осуществляется производственными лабораториями и может быть ограничен определением двух показателей: числа сапрофитных микроорганизмов (температура инкубации 37 град. C) и лактозоположительных кишечных палочек.

При текущем контроле качества воды в местах рекреации санитарно-микробиологический анализ ограничивается определением числа лактозоположительных кишечных палочек.

На водном объекте, эксплуатируемом в качестве источника водоснабжения или для рекреации, в случаях превышения установленных в соответствующих ГОСТ нормативов по коли-индексу для решения вопроса о проведении гигиенических и других мероприятий проводят дополнительные исследования:

- при неблагоприятной санитарной и эпидемической ситуации определяют патогенные микроорганизмы (сальмонеллы, шигеллы, кишечные вирусы, а в местах массового купания также и стафилококки);

- при необходимости уточнить источник и характер микробного загрязнения определяют энтерококки, фаги кишечных палочек.

Дополнительные исследования воды осуществляются органами санитарно-эпидемиологической службы.

1. Отбор, хранение и транспортирование проб воды

1.1. Отбор пробы воды осуществляется санитарным врачом, его помощником или специально инструктированным по методике отбора проб лицом под его личную ответственность.

1.2. Поверхностные пробы отбирают с глубины 10 - 15 см от поверхности воды или от нижней кромки льда. В случаях необходимости отбора проб на разных глубинах придонные пробы отбирают в 30 - 50 см от дна. В местах купания отбирают поверхностный слой воды, не заглубляя горлышко бутылки. Отбор проб следует производить с использованием различных плавсредств, с мостов, помостов и т.п., в местах, где глубина водоема не менее 0,5 м. Недопустимо производить отбор проб с берега.

1.3. Пробу воды отбирают с соблюдением правил стерильности: в стерильную посуду, стерильными батометрами, руки перед отбором проб должны быть обеззаражены. При отборе одним батометром нескольких проб его каждый раз стерилизуют фламбированием. Из одной точки в первую очередь отбирают пробы для микробиологических исследований, а затем для других целей. Проруби делают избегая внесения загрязнения со льда и инструментов. Посуду открывают непосредственно перед отбором, удаляя пробку вместе со стерильным колпачком. Во время отбора пробка и горлышко не должны чего-либо касаться. Ополаскивать посуду не следует.

После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой, обеспечивающей герметичность (корковой, резиновой, ватной, обернутой фольгой, и т.п.), и стерильным колпачком.

1.4. Объем пробы зависит от того, какие микроорганизмы должны быть определены:

- при анализе воды на индикаторные микроорганизмы - 500 мл;

- при анализе воды на индикаторные и патогенные бактерии (сальмонеллы, шигеллы) - 2500 мл;

- при анализе воды на индикаторные, патогенные бактерии и кишечные вирусы - 3500 мл.

2. Аппаратура, лабораторная посуда, реактивы, питательные среды

 

2.1. Аппаратура, лабораторная посуда, материалы и реактивы по ГОСТ 18963-73.

2.2. Реактивы для дополнительных методов исследования.

Агар-агар в волокнах или в порошке по ГОСТ 17206-71.

Агар с эозиновым метиленовым синим сухой ТУ 42.14.95-77.

Антибиотики: левомицетин (хлорамфеникол),

полимиксин М,

синтомицин,

фурациллин.

Висмут-сульфит агар сухой ТУ 42.14.127-78.

N,N'-диметил-пара-фенилендиамин солянокислый и другие фенилендиаминовые соединения ТУ 6-09-1828-72.

Желчь сгущенная и сухая для технических целей ОСТ 19-11-70.

Желчь крупного рогатого скота свежая или сухая обезвоженная.

Индикаторы: бриллиантовый зеленый ТУ 6-09-4278-76.

Калий теллуристокислый ТУ 6-09-2060-77.

Кислота ортофосфорная ТУ 6-09-4229-76.

Магний хлористый 6-водный по ГОСТ 4209-77.

Метиленовый синий.

Молоко.

Натрия азид.

Натрий двууглекислый по ГОСТ 2156-76.

Натрий кислый селенистокислый ТУ 6-09-1965-77.

Натрий углекислый по ГОСТ 4332-76.

Натрий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 4172-76.

Натрий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 245-76.

Альфа-нафтол по ГОСТ 5838-79.

Перекись водорода по ГОСТ 10929-76.

Пара-диметиламинобензальдегид ТУ 6-09-3272-77.

Сусло охмеленное.

Сыворотки агглютинирующие адсорбированные поливалентные сальмонеллезные О-сыворотки группы АВСДЕ (сухие) и редких групп.

Сыворотки О и Н сальмонеллезные агглютинирующие адсорбированные (сухие).

Сыворотки агглютинирующие адсорбированные поливалентные к шигеллам.

2, -3, -5-трифенилтетразолий хлорид ТУ 6-09-3838-78.

Ферментативный гидролизат казеина неглубокой степени расщепления ТУ 42.14.528-73.

Яйца куриные.

Примечание. Допустимая погрешность взвешивания 0,1%.

2.3. Подготовку посуды и материалов и их стерилизацию осуществляют в соответствии с ГОСТ 18963-73.

2.4. Приготовление питательных сред и реактивов.

2.4.1. Приготовление фуксин-сульфитной среды Эндо (в модификации Т.З. Артемовой).

Готовят из сухого препарата по прописи на этикетке. В готовую и охлажденную до 60 - 70 град. C среду перед разливкой в чашки допускается прибавлять на 100 мл среды: 0,2 мл 10% спиртового раствора основного фуксина для повышения дифференцирующих свойств среды. Добавление розоловой кислоты, рекомендуемое ГОСТ 18963-73, не обязательно.

Если на поверхности среды заметные следы влаги, чашки перед посевом необходимо подсушить. Срок хранения чашек со средой не более 2 - 3-х суток в темноте, раствора фуксина - не более 1-го месяца.

При исследовании методом мембранных фильтров воды чистой и средней степени загрязнения, где значительно преобладает над бактериями группы кишечных палочек водная микрофлора, вырастающая на среде Эндо, для частичного подавления роста посторонних бактерий на 100 мл среды Эндо допускается (помимо фуксина) добавление 0,4 - 0,5 мл 5-процентного водного раствора фенола и 1,8 мл этилового спирта.

2.4.2. Приготовление полужидкой среды с лактозой.

В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия, 4 - 5 г агар-агара, доводят до кипения, устанавливают pH (7,2 - 7,4), добавляют 1 мл 1,6% спиртового раствора бромтимолового синего. Стерилизуют при 120 +/- 2 град. C (1,1 кгс/кв. см) 20 мин. В расплавленную среду вносят 5 г лактозы, нагревают до кипения, разливают в стерильные пробирки столбиком высотой 3 см и стерилизуют при 112 град. C (0,5 кгс/кв. см) 12 мин. Срок хранения не более 2-х недель.

2.4.3. Приготовление полужидкой среды с лактозой из сухого препарата с ВР - по прописи на этикетке. Срок хранения не более 7 суток.

2.4.4. Приготовление лактозо-пептонной среды.

10 г пептона, 5 г хлористого натрия, 5 г лактозы растворяют при нагревании в 1000 мл дистиллированной воды. После растворения устанавливают pH (7,4 - 7,6), разливают по 10 мл в пробирки с поплавками или комочками ваты, стерилизуют в автоклаве при 112 град. C 12 мин. Для наглядности можно добавить индикатор по ГОСТ 18963-73.

Концентрированную лактозо-пептонную среду готовят так же, как и среду нормальной концентрации, но с добавлением на 1000 мл дистиллированной воды 39 г пептона, 19,3 г натрия хлористого, 19,3 г лактозы. Разливают по 3 мл в пробирки или по 15 мл во флаконы с поплавками.

2.4.5. Приготовление желчно-лактозного бульона с бриллиантовым зеленым по ГОСТ 18963-73.

При использовании среды для одновременного определения ферментации лактозы и образования индола следует уменьшить количество лактозы до 1 г и добавить 1 г триптофана (среда ФКП-1 Г.П. Калины). При отсутствии триптофана следует вместо воды использовать бульон Хоттингера, содержащий аминного азота 100 - 120 мг.